Cart
Products
Universal Magnetic Co-IP Kitの概要
Universal Magnetic Co-IP Kitは、より簡便かつ迅速に共免疫沈降 (Co-IP: Co-Immunoprecipitation) を行うことができるよう改良されたキットです。キット付属のプロテインG磁気ビーズを用いることで操作が簡素化され、バックグラウンドが大幅に低減されます。本キットには、哺乳動物細胞や組織から核抽出物および全細胞抽出物を調製するために最適化された試薬とプロトコルが含まれているため、核内タンパク質複合体および細胞質内タンパク質複合体のどちらにも使用できます。
核内のタンパク質複合体は壊れやすく核酸と分離することが難しいため、従来の共免疫沈降法では、抽出中にタンパク質間相互作用が壊れたりDNAに結合したまま失われたりするなど、 DNA結合タンパク質の抽出には適していません。Universal Magnetic Co-IP Kitは、全細胞抽出用の試薬だけでなく、核内タンパク質複合体の抽出に最適化された試薬も含まれています。
Universal Magnetic Co-IP Kitの特長
- 細胞や組織から、核内タンパク質複合体または細胞質内タンパク質複合体のCo-IPが可能
- マイルドな抽出方法により、タンパク質間相互作用を壊さず、複合体をDNAから分離することが可能
- 磁気ビーズによる低バックグラウンドで簡便かつ迅速な操作
- 阻害剤によりタンパク質修飾を維持
Universal Magnetic Co-IP Kitの構成品
Universal Magnetic Co-IP Kitは、ドライアイス同梱にて出荷されます。キット到着後は構成品を確認し、それぞれの試薬に適した温度で保管してください。すべての試薬は、受領後適切に保管された場合6ヶ月安定であることを保証いたします。本キットの構成品は以下の通りです。
- 10X PBS, 4°C
- 10X Hypotonic Buffer, 4°C
- Whole-cell Lysis Buffer, -20°C
- Co-IP/Wash Buffer, 4°C
- Detergent, 4°C
- 100X Phosphatase Inhibitors, -20°C
- Protease Inhibitor Cocktail, -20°C
- Deacetylase Inhibitor, -20°C
- 100 mM PMSF, -20°C
- 0.5 M EDTA, 4°C
- Digestion Buffer, 4°C
- Enzymatic Shearing Cocktail, -20°C
- Protein G Magnetic Beads, 4°C
- Bar Magnet, RT
- Mini Glue Dots, RT
Universal Magnetic Co-IP Kitのデータ
図1. 磁気ビーズの使用により、バックグラウンドを抑えつつ低ストリンジェンシーバッファーの使用が可能
Universal Magnetic Co-IP Kitを使用して、10 nM エストラジオールで1時間誘導したMCF7細胞から核抽出液を調製した。300 μgの核抽出液に2 μgのSRC-1 pAb、ERα pAb、ウサギIgG (ネガティブコントロール) を用いてCo-IPを行った。その後、10 μgのInput Extract、SRC-1 IP、ERα IP、ウサギIgG IPに対してERα pAbを用いたウエスタンブロットを行った。
図2. 独自のEnzymatic Shearing Cocktailにより、タンパク質複合体をDNAから分離し、ヒストン複合体の回収も可能
Universal Magnetic Co-IP Kitまたは従来の高塩抽出プロトコルを使用して、脱アセチル化酵素阻害剤である1 μM トリコスタチンAを添加したHeLa細胞から核抽出液を調製した。5, 10 μgの核抽出液について、Histone H3 acetyl pAbを用いたウエスタンブロットを行った。本キットの核抽出手順は、修飾を保持したままヒストンや他のタンパク質複合体をDNAから分離するよう設計されているため、本キットを使用したサンプルでのみタンパク質が検出された。
Universal Magnetic Co-IP KitのFAQ
Nuclear Complex Co-IP Kit (商品コード 54001)とUniveral Magnetic Co-IP Kit (商品コード 54002)の違いは？
主な違い：
| Nuclear Complex Co-IP Kit (Cat No. 54001) | Universal Magnetic Co-IP kit (Cat No. 54002) |
|---|---|
| 核抽出液 | 核抽出液もしくは細胞抽出液 |
| ストリンジェンシーの違うwash bufferを使ってカスタマイズ可能 | 簡単 |
| Protein G アガロースカラムを推奨 |
磁気ビーズを利用（キット同梱） |
Universal Magnetic Co-IP kit 使用時は、ストリンジェンシーを上げるべきですか？
Universal Magnetic Co-IP Kitに含まれるProtein G Magnetic Beadsは、非特異的結合が非常に少ないビーズです。これにより、低ストリンジェンシーなバッファーでもバックグラウンドは非常に低く、壊れやすいタンパク質複合体の回収を可能にします。特定の細胞株、刺激、抗体などにより、バックグラウンドが高くなる場合がありますが、その場合には、洗浄回数を４回から６回に増やすことをお奨めします。
このキットで調製したサンプルは、質量分析 (MS/LC-MS) で解析できますか？
アクティブ・モティフでは、質量分析での解析を検証していません。しかしながら、多くの文献で使用されています。質量分析装置の中には、バッファーに使用されている物質に対して影響があるかもしれません。お使いの機器のマニュアル、施設における使用不可物質の情報をご確認ください。該当物質が試薬に含まれているか情報提供が可能です。
Universal Magnetic Co-IP Kitの論文使用実績
お客様の投稿した論文実績データベースから、Universal Magnetic Co-IP Kitの使用例が検索可能です。
Universal Magnetic Co-IP Kitの技術資料
こちらもご参照ください
| Name | Format | Cat No. | Price | |
|---|---|---|---|---|
| Universal Magnetic Co-IP Kit | 25 rxns | 54002 | ¥90,000 | Buy |
Universal Magnetic Co-IP Kit advantages
- Perform Co-IP of nuclear or cytoplasmic protein complexes, beginning from cells or tissue
- Magnetic beads speed and simplify the procedure while reducing background, enabling the use of low-stringency buffers that maintain complex integrity
- Nuclear extraction procedure removes nuclear protein complexes from the DNA without disrupting protein/protein interactions
- Inhibitor solutions included to preserve the integrity of protein modifications
Perform Co-IP of cytoplasmic & nuclear protein complexes
While Co-IP is often used to study cytoplasmic protein complexes, traditional methods are not optimal for studying DNA-binding proteins because these nuclear complexes are fragile and can be difficult to remove from the DNA. This causes them to either be disrupted during extraction, or to be lost because they remain bound to the DNA. For this reason, in addition to containing components for whole-cell extraction, the Universal Magnetic Co-IP Kit provides nuclear extraction reagents that have been optimized to preserve nuclear protein complexes. The reduced background provided by the low non-specific binding of the kit's magnetic beads makes it possible to use a low-stringency Co-IP/Wash Buffer that helps maintain the protein complexes (Figure 1). To further improve Co-IP of nuclear complexes, the kit’s proprietary Enzymatic Shearing Cocktail uses DNA digestion to release undissociated protein complexes from the DNA. Even histone complexes, which are not released from the DNA by traditional high-salt extraction methods, can be studied (Figure 2).
Figure 1: Co-Immunoprecipitation of a nuclear complex containing SRC-1 and ERα.
The Universal Magnetic Co-IP Kit was used to make nuclear extract from MCF-7 cells that had been induced 1 hour with 10 nM Estradiol. IP was performed on 300 µg samples using 2 µg of SRC-1 pAb, ERα pAb and rabbit IgG (as a negative control). Western blot was then performed using the ERα pAb on 10 µg Input Extract, SRC-1 IP, ERα IP and the rabbit IgG IP.
Figure 2: Detection of acetylated Histone H3.
HeLa nuclear extracts were made using the Universal Magnetic Co-IP Kit and a traditional high-salt extraction protocol, supplemented with 1 µM trichostatin A, a deacetylase inhibitor. Five and ten µg samples of each extract were used in Western with Histone H3 acetyl pAb. Protein was detected only in samples made using the kit’s nuclear extraction procedure, as it was designed to release histone and other protein complexes from DNA while preserving modifications.
Contents & Storage
Each Universal Magnetic Co-IP Kit provides sufficient reagents to make 25 nuclear and 25 whole-cell extractions, and then to perform 25 co-immunoprecipitations. Kits include PBS, Hypotonic Buffer, Whole-cell Lysis Buffer, Co-IP/Wash Buffer, Phosphatase Inhibitors, Protease Inhibitor Cocktail, Deacetylase Inhibitor, PMSF, EDTA, Digestion Buffer, Enzymatic Shearing Cocktail, Detergent, Protein G Magnetic Beads and a Bar Magnet for making a magnetic stand. The reagent storage conditions vary from room temperature to -20°C. Please download a manual for complete kit specifications and storage conditions. All reagents are guaranteed stable for 6 months when stored properly.
The following publications cite the use of and/or provide additional information about the Universal Magnetic Co-IP Kit:
- “PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3.” by Benitez et al. (2017) Nature Communications 8(15223).
