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受託サービス

インタラクトーム解析(RIME)

質量分析によるタンパク質相互作用解析

RIME (Rapid Immunoprecipitation Mass spectrometry of Endogenous proteins) は近年開発された転写コファクターとクロマチン関連タンパク質の識別を行うための技術です。

RIME Method
RIME は, Cell Reports で発表されました。

 

RIME サービスの内容:

  1. 核の単離およびソニケーション
  2. 免疫沈降
  3. タンパク質の精製およびトリプシン消化
  4. 質量分析
  5. データ解析

ご興味をお持ちの方は,エピジェネティクスサービス リクエストフォーム に必要事項を記入してください。エピジェネティクス受託サービスの概要については Epigenetic Services Profile をご覧ください。

RIME 解析手法はこの Cell Reports で発表されました。 

 
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RIME 25067 Request Quote

質量分析の技術を利用したRIMEは、ホルムアルデヒドで固定化した細胞から、免疫沈降したタンパク質の結合タンパク質を網羅的に同定する手法です

細胞をクロスリンクするメリット:

  1. 強力な結合を形成することで、洗浄を強力に行えるため、非特異的な結合などのバックグラウンドの低減が可能
  2. 洗浄により分離してしまうような弱い結合タンパク質も同定可能
  3. 遺伝子調節に関与するが、標的タンパク質との直接相互作用によって機能しない隣接するDNA結合タンパク質も捕捉可能

RIMEでわかること:

  1. 転写因子、コファクター/共役因子の同定
  2. エピジェネティックな修飾関連タンパク質複合体の同定
  3. 結合が弱いタンパク質の同定
  4. タンパク質相互作用ネットワークのマッピング
  5. ChIP-Seqにより同定されたタンパク質を検証し、RIME標的タンパク質と相互作用する因子のゲノム上のマッピング
  6. 共役因子の遺伝子発現調節への役割について知見
  7. 隣接する領域における転写因子結合とともに起こる顕著な変化を同定

     

 

RIME Venn Data
Figure 1: Venn Diagram of RIME treated MCF7 cells

RIME was performed to identify proteins that interact with the RNA polymerase machinery. Immunoprecipitations were performed with an antibody against POLR2A and two different amounts of cross-linked chromatin from MCF7 cells. Immunoprecipitated proteins were measured by mass spectrometry. The Venn diagram shows strong overlap of the detected proteins even in experiments using a 10 fold difference in starting material.


RIME POLR2A Coverage

RIME GO data

Advanced Application: RIME and ChIP-Seq

RIME was performed using BRD4 as the target protein and from the list of interacting proteins. DNA Topoisomerase 2A was identified as an interactor, which is supported by literature demonstrating that ligand-dependent Topoisomerases have been shown to be recruited to enhancers. Therefore, ChIP-Seq targeting BRD4 and TOP2A was performed to show co-localization. Expanding on RIME data with ChIP-Seq can help elucidate gene subsets that require different transcription factors or confirm co-localization of RIME-identified co-factors to the same genes.

ChIP-Seq shows co-localization of TOP2A and BRD4 binding sites.

 

ChIP-Seq shows co-localization of TOP2A and BRD4 binding sites.
Figures 1 & 2: ChIP-Seq shows co-localization of TOP2A and BRD4 binding sites.

ChIP-Seq was performed to map binding sites for the RIME-identified BRD4 interacting protein, TOP2A. TOP2A and BRD4 binding sites are shown and confirm co-localization at many sites across the genome. The top panel shows sites on chromosome 1 and the bottom panel shows sites on chromosome 3.

References for ATAC-Seq & Omni ATAC-Seq publications