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Histone Purificaion Kit は培養細胞や組織試料からヒストンのアセチル化，メチル化，リン酸化といった翻訳後修飾を保持したまま，簡便にコアヒストンを単離するキットです。さらにヒストンH2A-H2B とヒストンH3-H4 画分に分離することもできます。
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Histone Purification Kit (Cat. No. 40025)
| Name | Format | Cat No. | 価格 (税抜) | |
|---|---|---|---|---|
| Histone Purification Kit | 10 rxns | 40025 | ¥119,000 | Buy |
| Protease Inhibitor Cocktail | 1 ml | 37490 | ¥33,000 | Buy |
| 5 ml | 37491 | ¥87,000 | Buy | |
| Deacetylase Inhibitor | 5 ml | 37494 | ¥41,000 | Buy |
| Extraction Buffer | 100 ml | 37513 | ¥25,000 | Buy |
| 5X Neutralization Buffer | 50 ml | 37514 | ¥25,000 | Buy |
Histone Purification Kitの使用法
Histone Purification Kit は従来法の酸を使用した沈殿法とは異なり，精製用樹脂と弊社独自の一連の溶出バッファー使用することにより，高純度のヒストンを単離します。この精製用樹脂はヒストンとの結合能が高く，少量の培養細胞から数グラムの組織に至るまでの試料からコアヒストンを単離できます。溶出ステップを選択することにより，全てのコアヒストンを含む混合物を単離できるだけでなく，それをさらに2 種類の画分に分離することも可能です。2 種類の画分の片方にはH2AとH2B が，もう片方にはH3とH4 が高純度で含まれます (図1)。
図1: 単離したコアヒストンのSDS-PAGE解析
それぞれのレーンには10 µg の試料を泳動した。左図：それぞれ対数増殖期(Log.), 有糸分裂停止期, 酪酸ナトリウム処理したHeLa細胞から単離したコアヒストン。中央図: ラット脳組織から単離したコアヒストン。 右図：HeLa細胞から単離したヒストンH2A-H2BおよびヒストンH3-H4。
Histone Purification Kitには再利用できる精製カラム, include a reusable purification column and 中和バッファー, 平衡バッファー, 洗浄バッファー, H2A/H2B 溶出バッファー, H3/H4 溶出バッファーが付属しており, 細胞や組織試料から簡便にコアヒストンを単離できます。また, この精製樹脂はヒストンとの結合能が高く, わずか10cmプレートの培養細胞や数グラムの組織試料からコアヒストンを単離できます。15 cmディッシュ3枚または2.5 mgの組織から約 0.4-0.5 mg のトータルコアヒストンを単離することができ, 単離した小ヒストンは下流のアッセイでそのまま使用できます。
Histone Purification Kit で単離したヒストンは非常に純度が高く, 下流のアッセイにおいて基質として使用するのに適しています。本キットで単離したヒストンは Chromatin Assembly Kit で用いることにより, 天然のクロマチンに非常に近いクロマチンを再構成することができ, 機能アッセイに最適です。
Histone Purification Kitの利点
- ヒストン H2A/H2B とヒストン H3/H4 をそれぞれに含む画分に分離できます。
- ヒストン修飾を保持します。
- 新しい精製樹脂と独自の一連の溶出バッファーを使用することにより, 高純度のヒストンを単離します。
Contents & Storage
Please note that the Histone Purification Kit is shipped at room temperature and contains reagents with multiple storage temperatures inside. Please store each component at the temperature indicated below. All reagents are guaranteed stable for 6 months from date of receipt when stored properly. Each Histone Purification Kit supplies sufficient reagents to perform 10 purifications. This kit includes the following components:
- Extraction Buffer; Store at 4°C
- 5X Neutralization Buffer; Store at 4°C
- Equilibration Buffer; Store at 4°C
- Histone Wash Buffer; Store at 4°C
- Histone H2A/H2B Elution Buffer; Store at 4°C
- Histone H3/H4 Elution Buffer; Store at 4°C
- Purification Resin; Store at 4°C
- Purification Column; Store at RT prior to assembly, then store at 4°C
